G418溶液(geneticin,20mg/ml)

產品描述

新霉素(geneticin, G418)又稱遺傳霉素，是一種氨基糖苷類抗生素，能阻斷蛋白質合成，對細菌、酵母、高等植物以及哺乳動物細胞均有毒性，用于真核細胞從轉座子 Tn5 和 Tn601 穩定轉染新霉素(neo)抗性基因的選擇和維持，經常用于基因轉移、基因敲除、抗性篩選以及轉基因動物等方面。

本產品經過濾除菌，一般工作濃度為 50~1000μg/ml 不等，不同類型的細胞需要根據實驗確定*佳濃度，在具有相對穩定基因組的細胞（如 CHO 細胞）中一旦篩選出穩定細胞株后，無需加入 G418 即可繼續培養，是常用的細胞穩定轉染抗性篩選試劑。

訂購信息

運輸與保存

藍冰運輸。-20℃保存，有效期12個月。

使用方法

1.       由于每種細胞對 G418 的敏感性不同，且不同批次 G418 的活性也不盡相同，所以篩選之前，需要確定 G418 的*佳篩選濃度，一般在 50~1000μg/ml 范圍內進行篩選。

2.       將細胞制備成細胞懸液，并稀釋到 1000 個/ml。

3.       加入不同量的 G418 Solution (20mg/ml)，選擇在 10~14d內使細胞全部死亡的*低G418 濃度來進行下一步的篩選試驗。

注意事項

1.       本產品科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。

2.       減少反復凍融的次數，以免失效。

3.       基因轉染到細胞內后，需要一段時間才能表達出蛋白質，所以選不宜太早。

4.       篩選也不宜太遲，一般要在轉染 24h 之后才開始加 G418 篩選，因為轉染了外源基因的細胞代謝負荷較大，增值較慢，時間長了就會被沒有外源基因轉入的細胞所淹沒，最終導致篩選不出陽性克隆。

5.       隨著細胞代謝，G418的濃度和活性都會下降，應每 3~5d更換一次含有 G418 的篩選液，這時藥物濃度可以降至 200ug/ml。

6.       加藥篩選約 5~7d左右，細胞會大量死亡，為了減少死亡細胞對陽性克降的不利影響以及增加陽性克隆的獲得率，可以應用套環法或刮除法結合有限稀釋法來篩選陽性克隆加藥后在高倍鏡下，刮除陰性克隆，消化陽性克隆后繼續篩選培養或者用套環套住陽性克隆，在套環內加胰蛋白酶消化，把消化液吸到另外一個新的孔中培養，最后再用有限稀釋法把陽性克隆在 96 孔板中篩選。

7.       一般經過4周左右的篩選，得到的陽性克隆都比較穩定，但是外源基因如果沒有整合到基因組中的話，目的基因還是很容易丟失的，再次篩選往往是不可少的，經過2次上的篩選之后才能找到遺傳穩定的細胞克隆。

8.       注意無菌操作，盡量避免污染。