Quick Cell支原體基因組DNA提取試劑盒

產(chǎn)品描述

Quick Cell 支原體基因組 DNA 提取試劑盒專(zhuān)為高效提取支原體基因組DNA而設(shè)計(jì)，其操作流程和試劑配方均針對(duì)支原體的生物學(xué)特性進(jìn)行了優(yōu)化，適用于多種樣本類(lèi)型，包括：細(xì)胞、細(xì)胞上清、血清、 血漿、全血、生物制品等。提取的 DNA 可直接用于 Quick Cell 系列支原體檢測(cè)試劑盒（恒溫快速法、PCR法、探針?lè)ǎＦ浜诵淖饔迷谟冢喝コ龢悠分袧撛诘?span> PCR 抑制劑或顯色干擾物，并濃縮支原體DNA，顯著提升檢測(cè)靈敏度達(dá)10-100倍。

訂購(gòu)信息

產(chǎn)品組分

【注】：需自備的試劑和耗材：（1）無(wú)水乙醇，約 65 mL；（2）1.5 mL 離心管。

運(yùn)輸與保存

常溫運(yùn)輸。組分A在-20℃保存，其他室溫或4?C保存，有效期36個(gè)月。

使用方法

1.     實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

(1)  Wash Buffer GW1/GW2：第一次使用前，按標(biāo)簽說(shuō)明加入無(wú)水乙醇，并在瓶上做好標(biāo)記。

(2)  Buffer GL：使用前檢查是否有結(jié)晶或沉淀。如有，請(qǐng)于 56?C 水浴溶解。

2.     樣本處理

(1)  待測(cè)樣品的選擇：本試劑盒優(yōu)選體外培養(yǎng)的細(xì)胞上清（貼壁細(xì)胞直接取細(xì)胞培養(yǎng)上清）、血清、血漿、溶液型生物制品作為提取支原體基因組 DNA 的樣品。如果是粉末型樣品，需用水溶解后，再進(jìn)行后續(xù)操作。

懸浮細(xì)胞： 可經(jīng) 1200 rpm (約 150 g) 離心 5 min（【注】：離心力過(guò)大可能去除支原體），取上清。若細(xì)胞量少（< 500 萬(wàn)個(gè)），也可直接取培養(yǎng)物。

抗凝全血： 可經(jīng) 1200 rpm (約 150 g) 離心 5 min（【注】：離心力過(guò)大可能去除支原體），取血漿；或直接取 200 μL 全血。

非抗凝全血： 凝固后取血清。

(2)  取上述細(xì)胞上清、血清、血漿、生物制品等樣品 200 μL，用移液槍吹吸均勻后，進(jìn)行后續(xù)操作。

3.     向以上溶液中加入 20 μL Proteinase K（20 mg/mL）溶液，混勻。

4.     加入 200 μL Buffer GL，混勻。【注】：不要將 Proteinase K 和 Buffer GL 進(jìn)行預(yù)混，否則 Proteinase K 可能失活。

5.     將離心管放置 56?C 水浴，孵育 15 min。

6.     （選做）加入 10 μL 支原體 qPCR 內(nèi)參質(zhì)粒 mycoIC2。【注1】：內(nèi)參質(zhì)粒 mycoIC2 只在本公司Quick Cell 探針?lè)ㄖгw檢測(cè)試劑盒內(nèi)含有，如果使用其他支原體檢測(cè)方法，本步驟可以跳過(guò)！【注2】：加入的內(nèi)參質(zhì)粒 mycoIC2 用于監(jiān)控支原體 DNA 的提取和后續(xù)支原體 qPCR 的擴(kuò)增是否有效。

7.     加入 200 μL 無(wú)水乙醇，上下顛倒混勻數(shù)次。1000 rpm（約 100 g）低速短暫離心（20 Sec），使管壁和壁蓋上的液體集中到管底。

8.     將全部溶液加入到已裝入收集管的吸附柱(Spin Columns DM）中。12,000 rpm 離心 1 min，棄廢液，吸附柱放回收集管。

9.     向吸附柱中加入 500 μL Buffer GW1, 蓋上蓋子，快速顛倒一次（目的：清洗管壁和蓋子），12,000 rpm 離心 1 min，棄廢液，吸附柱放回收集管。

10. 向吸附柱中加入 500 μL Buffer GW2，快速顛倒一次，12,000 rpm 離心 1 min，棄廢液，吸附柱放回收集管。

11. 再次清洗：向吸附柱中加入 600 μL Buffer GW2，蓋上蓋子，快速顛倒一次，12,000 rpm 離心 1 min，棄廢液，吸附柱放回收集管。

12. 繼續(xù) 12,000 rpm 離心 2 min。注：離心后，在亮光下檢查吸附膜上方塑料墊圈四周是否有液體殘留。如有殘留，將有殘留側(cè)置于離心力內(nèi)側(cè)，12,000 rpm 再離心 1 min。

13. 棄收集管，將吸附柱置于新的 1.5 mL 離心管中。打開(kāi)蓋子，50-65℃烘箱放置 ≥15 min（或 37℃培養(yǎng)箱/室溫放置 ≥30 min），確保乙醇揮發(fā)完（避免影響后續(xù)酶反應(yīng)）。

14. 向吸附柱中間部位懸空加入50 μL Elution Buffer EB，室溫放置 2 min，12,000 rpm 離心 1 min，收集 DNA 溶液，-20℃保存。

【注1】：本 Elution Buffer EB 已優(yōu)化，與本公司所有支原體檢測(cè)試劑盒兼容。使用其他品牌洗脫液時(shí)，加大 DNA 加樣量（如從 2 μL 增至 20 μL）可能影響擴(kuò)增效率。

【注2】：如果樣品的初始體積分別是 200 μL、1 mL 或 5 mL，經(jīng)最后 50 μL 洗脫，則支原體 DNA 分別大約濃縮了 4 倍、20 倍或 100 倍，支原體檢測(cè)的相對(duì)靈敏度也大約提高了 4 倍、20 倍或 100 倍。

注意事項(xiàng)

1.       本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2.       必須確保使用的移液槍本身沒(méi)有殘留的支原體，盡量用新購(gòu)移液器、新開(kāi)封的槍頭操作。整個(gè)操作過(guò)程，佩戴口罩，不要開(kāi)口說(shuō)話(huà)。

3.       如待測(cè)樣品是低溫保存的血漿、血清、臍帶血、胰酶、抗生素、未使用的培養(yǎng)液等，這類(lèi)樣品中支原體含量較低，為了保證支原體DNA的檢出率，可通過(guò)離心濃縮提高樣品DNA濃度，再進(jìn)行檢測(cè)。離心濃縮方法：取1 mL樣品于1.5 mL離心管中，13000 rpm（約16000 g）離心5min，棄去800 μL上清，剩余200 μL混勻。

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